Use of MALDI-TOF for identification and surveillance of gram-negative bacteria in captive wild psittacines / Uso do MALDI-TOF para identificação e monitoramento de bactérias Gram-negativas em psitacídeos cativos

Microbiological studies of the sanitary and health status of psittacine birds that will be reintroduced is important in evaluating whether these animals act as carriers of pathogenic agents to other animals and humans. Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) is a faster and more accurate method to identify bacteria than conventional microbiology methods. The aim of this study was to evaluate the health status of psittacines housed in captivity, by assessment of Gram-negative bacteria from fecal microbiota through MALDI- TOF MS identification. The results indicate high frequency of Gram-negative bacteria in feces (96.5%), especially from the Enterobacteriaceae family (88.7%). The most prevalent bacteria were Escherichia coli (39.0%), Proteus vulgaris (12.2%), Klebsiella spp. (12.1%) and Raoultella ornithinolytica (8.7%). Proteus hauseri, Citrobacter spp., Morganella morgannii, Providencia rettgeri, Enterobacter spp. and Escherichia hermannii were isolated with lower frequency. . All these agents are potentially pathogenic for parrots and can cause systemic infections in other animals and humans. These findings reinforce that MALDI- TOF MS proved to be a rapid and accurate method of identification of the microorganism and evaluation of the health status of psittacines, providing relevant data to assist decision-making regarding the sanitary protocols in wildlife centers, and possible future reintroduction of wild birds.

Estudos microbiológicos da sanidade de psitacídeos que serão reintroduzidos são importantes para avaliar se esses animais atuam como portadores de agentes patogênicos para outros animais e humanos. A espectrometria de massa por ionização/dessorção de matriz assistida por laser/tempo de vôo (MALDI-TOF MS) é um método mais rápido e preciso para identificar bactérias na comparação com métodos convencionais de microbiologia. O objetivo deste estudo foi avaliar o estado de saúde de psitacídeos cativos, identificando bactérias Gram-negativas da microbiota fecal por MALDI -TOF MS. Os resultados indicaram alta frequência de bactérias Gram-negativas nas fezes (96,5%), principalmente da família Enterobacteriaceae (88,7%). As mais prevalentes foram Escherichia coli (39,0%), Proteus vulgaris (12,2%), Klebsiella spp. (12,1%) e Raoultella ornithinolytica (8,7%). Proteus hauseri, Citrobacter spp., Morganella morgannii, Providencia rettgeri, Enterobacter spp. e Escherichia hermannii foram isolados com menor frequência. Todos esses agentes são potencialmente patogênicos para os papagaios e podem causar infecções sistêmicas em outros animais e seres humanos. Esses achados reforçam que o MALDI- TOF MS é um método rápido e preciso de identificação do microrganismo e avaliação do estado de saúde dos psitacídeos, fornecendo dados relevantes para auxiliar na tomada de decisões sobre os protocolos sanitários em centros de triagem de animais selvagens e sobre a possibilidade de reintrodução futura.

Use of MALDI-TOF for identification and surveillance of gramnegative bacteria in captive wild psittacines / Uso do MALDI-TOF para identificação e monitoramento de bactérias Gram negativas em psitacídeos cativos

Microbiological studies of the sanitary and health status of psittacine birds that will be reintroduced is important in evaluating whether these animals act as carriers of pathogenic agents to other animals and humans. Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) is a faster and more accurate method to identify bacteria than conventional microbiology methods. The aim of this study was to evaluate the health status of psittacines housed in captivity, by assessment of Gram-negative bacteria from fecal microbiota through MALDI- TOF MS identification. The results indicate high frequency of Gram-negative bacteria in feces (96.5%), especially from the Enterobacteriaceae family (88.7%). The most prevalent bacteria were Escherichia coli (39.0%), Proteus vulgaris (12.2%), Klebsiella spp. (12.1%) and Raoultella ornithinolytica (8.7%). Proteus hauseri, Citrobacter spp., Morganella morgannii, Providencia rettgeri, Enterobacter spp. and Escherichia hermannii were isolated with lower frequency. . All these agents are potentially pathogenic for parrots and can cause systemic infections in other animals and humans. These findings reinforce that MALDI- TOF MS proved to be a rapid and accurate method of identification of the microorganism and evaluation of the health status of psittacines, providing relevant data to assist decision-making regarding the sanitary protocols in wildlife centers, and possible future reintroduction of wild birds.

Estudos microbiológicos da sanidade de psitacídeos que serão reintroduzidos são importantes para avaliar se esses animais atuam como portadores de agentes patogênicos para outros animais e humanos. A espectrometria de massa por ionização/dessorção de matriz assistida por laser/tempo de vôo (MALDI-TOF MS) é um método mais rápido e preciso para identificar bactérias na comparação com métodos convencionais de microbiologia. O objetivo deste estudo foi avaliar o estado de saúde de psitacídeos cativos, identificando bactérias Gram-negativas da microbiota fecal por MALDI -TOF MS. Os resultados indicaram alta frequência de bactérias Gram-negativas nas fezes (96,5%), principalmente da família Enterobacteriaceae (88,7%). As mais prevalentes foram Escherichia coli (39,0%), Proteus vulgaris (12,2%), Klebsiella spp. (12,1%) e Raoultella ornithinolytica (8,7%). Proteus hauseri, Citrobacter spp., Morganella morgannii, Providencia rettgeri, Enterobacter spp. e Escherichia hermannii foram isolados com menor frequência. Todos esses agentes são potencialmente patogênicos para os papagaios e podem causar infecções sistêmicas em outros animais e seres humanos. Esses achados reforçam que o MALDI- TOF MS é um método rápido e preciso de identificação do microrganismo e avaliação do estado de saúde dos psitacídeos, fornecendo dados relevantes para auxiliar na tomada de decisões sobre os protocolos sanitários em centros de triagem de animais selvagens e sobre a possibilidade de reintrodução futura.

Use of MALDI-TOF for identification and surveillance of gram-negative bacteria in captive wild psittacines

Abstract Microbiological studies of the sanitary and health status of psittacine birds that will be reintroduced is important in evaluating whether these animals act as carriers of pathogenic agents to other animals and humans. Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) is a faster and more accurate method to identify bacteria than conventional microbiology methods. The aim of this study was to evaluate the health status of psittacines housed in captivity, by assessment of Gram-negative bacteria from fecal microbiota through MALDI- TOF MS identification. The results indicate high frequency of Gram-negative bacteria in feces (96.5%), especially from the Enterobacteriaceae family (88.7%). The most prevalent bacteria were Escherichia coli (39.0%), Proteus vulgaris (12.2%), Klebsiella spp. (12.1%) and Raoultella ornithinolytica (8.7%). Proteus hauseri, Citrobacter spp., Morganella morgannii, Providencia rettgeri, Enterobacter spp. and Escherichia hermannii were isolated with lower frequency. . All these agents are potentially pathogenic for parrots and can cause systemic infections in other animals and humans. These findings reinforce that MALDI- TOF MS proved to be a rapid and accurate method of identification of the microorganism and evaluation of the health status of psittacines, providing relevant data to assist decision-making regarding the sanitary protocols in wildlife centers, and possible future reintroduction of wild birds.

Resumo Estudos microbiológicos da sanidade de psitacídeos que serão reintroduzidos são importantes para avaliar se esses animais atuam como portadores de agentes patogênicos para outros animais e humanos. A espectrometria de massa por ionização/dessorção de matriz assistida por laser/tempo de vôo (MALDI-TOF MS) é um método mais rápido e preciso para identificar bactérias na comparação com métodos convencionais de microbiologia. O objetivo deste estudo foi avaliar o estado de saúde de psitacídeos cativos, identificando bactérias Gram-negativas da microbiota fecal por MALDI -TOF MS. Os resultados indicaram alta frequência de bactérias Gram-negativas nas fezes (96,5%), principalmente da família Enterobacteriaceae (88,7%). As mais prevalentes foram Escherichia coli (39,0%), Proteus vulgaris (12,2%), Klebsiella spp. (12,1%) e Raoultella ornithinolytica (8,7%). Proteus hauseri, Citrobacter spp., Morganella morgannii, Providencia rettgeri, Enterobacter spp. e Escherichia hermannii foram isolados com menor frequência. Todos esses agentes são potencialmente patogênicos para os papagaios e podem causar infecções sistêmicas em outros animais e seres humanos. Esses achados reforçam que o MALDI- TOF MS é um método rápido e preciso de identificação do microrganismo e avaliação do estado de saúde dos psitacídeos, fornecendo dados relevantes para auxiliar na tomada de decisões sobre os protocolos sanitários em centros de triagem de animais selvagens e sobre a possibilidade de reintrodução futura.

Erratic migration of Ascaridia hermaphrodita (Nematoda: Ascaridida) in a blue-fronted Amazon parrot (Amazona aestiva) from illegal wildlife trade: case report / [Migração errática de Ascaridia hermaphrodita (Nematoda: Ascaridida) em papagaio-verdadeiro (Amazona aestiva) oriundo do comércio ilegal: relato de caso]

Ascaridiasis by Ascaridia hermaphrodita is a common parasitic disease in blue-fronted Amazon parrots (Amazona aestiva) and the contamination occurs by ingestion of eggs. Illegal trade of wild birds can increase the frequency of visceral erratic migration by this parasite. Hence, this report describes the erratic migration of A. hermaphrodita and associated lesions in a blue-fronted Amazon parrot. This is a retrospective study, which originated from several apprehension of illegal birds in the state of Paraíba, Brazil. Necropsy revealed intense intestinal ascarid infestation. Hepatic lesions were also observed associated with the parasite migration. Stereoscopy allowed the identification of the morphology of the parasites. Summarizing, this condition in wild birds is not fully understood and may be associated with illegal trade.(AU)

Ascaridíase por Ascaridia hermaphrodita é uma doença parasitária comum em papagaios-verdadeiros. Sua contaminação ocorre pela ingestão de ovos. O tráfico de aves silvestres pode facilitar a migração errática visceral desse parasita. Este relato descreve a migração errática de A. hermaphrodita e lesões associadas em papagaio-verdadeiro. Trata-se de um relato retrospectivo, analisado a partir de uma série de apreensões de aves no estado da Paraíba, Brasil. A necropsia revelou intensa infestação ascarídea intestinal. Também foram observadas lesões hepáticas em uma ave, associadas à migração do parasita. A estereoscopia permitiu distinguir a morfologia dos parasitas. Resumidamente, essa condição em aves silvestres é pouco conhecida e pode ser considerada, inclusive, associada à comercialização ilegal.(AU)

Antimicrobial susceptibility profile of enterobacteria isolated from wild grey-breasted parakeets (Pyrrhura griseipectus) / Perfil de susceptibilidade antimicrobiana de enterobactérias isoladas de periquitos-de-cara-suja (Pyrrhura griseipectus)

The grey-breasted parakeet (Pyrrhura griseipectus) is an endangered psittacine species that have been affected by illegal trade and deforestation. Currently, this endemic species is only found in three areas in Ceará state, in Brazil. This study aimed to investigate the frequency and diversity of Enterobacteriaceae in wild adult grey-breasted parakeets and determine their susceptibility to antimicrobial agents. Cloacal swab samples were collected from 27 individuals and environmental swabs (drag swabs) from five nests used by these birds. Twenty-seven strains from nine species of Enterobacteriaceae were recovered from cloacal swabs, and the most prevalent bacteria strains were Hafnia alvei (22%) and Pantoea agglomerans (22%). From environmental nest samples, seven strains from three bacterial species were isolated, being the P. agglomerans the most frequent species (100%). Twenty-two of the 27 isolates (81.4%) exhibited antibiotic resistance, varying from one to eight of the 12 antimicrobials commonly used. Resistance to amoxicillin was the most prevalent (70.4%), followed by azithromycin (22.2%) and ceftriaxone (18.5%). None of the strains were resistant to gentamicin, tobramycin, ciprofloxacin or tetracycline. The H. alvei was the main species presenting multidrug resistance, including resistance against meropenem, which is an important finding. These results could provide interesting information on the health of these endangered wild grey-breasted parakeets. They could also indicate that the obtained isolates are part of a group of bacteria that are typical components of the enteric microbiota of birds, which present elevated rates of resistance to amoxicillin.(AU)

O periquito-de-cara-suja (Pyrrhura griseipectus) é uma espécie de psitacídeo considerado pela IUCN como ameaçado de extinção, resultado do comércio ilegal e do desmatamento. Atualmente, essa espécie endêmica é encontrada apenas em três áreas no estado do Ceará, Brasil. O objetivo deste estudo foi investigar a frequência e a diversidade de Enterobacteriaceae em periquitos de peito cinza adultos selvagens e determinar sua suscetibilidade a agentes antimicrobianos. Amostras de suabes cloacais foram coletadas de 27 indivíduos e de suabes ambientais (suabes de arrasto) de cinco ninhos utilizados por essas aves. Vinte e sete cepas de nove espécies de Enterobacteriaceae foram isoladas a partir de suabes cloacais, sendo as cepas bacterianas mais prevalentes Hafnia alvei (22%) e Pantoea agglomerans (22%). Das amostras ambientais de ninhos foram isoladas sete linhagens de três espécies bacterianas, sendo P. agglomerans a espécie mais frequente (100%). Vinte e dois dos 27 isolados (81,4%) exibiram resistência a antibióticos, variando de um a oito dos 12 antimicrobianos comumente usados. A resistência a amoxicilina foi a mais prevalente (70,4%), seguida por azitromicina (22,2%) e ceftriaxona (18,5%). Nenhuma das cepas era resistente à gentamicina, tobramicina, ciprofloxacina ou tetraciclina. H. alvei foi a principal espécie que apresentou resistência a múltiplas drogas e que também esteve associada a um outro achado relevante desta pesquisa, que foi a detecção de um caso de resistência ao meropenem. Esses dados fornecem informações relevantes sobre a saúde desses periquitos selvagens ameaçados e permite concluir que os isolados obtidos fazem parte de um grupo de bactérias que normalmente compõe a microbiota entérica das aves, sendo a amoxicilina envolvida em elevadas taxas de resistência.(AU)

Antimicrobial susceptibility profile of enterobacteria isolated from wild grey-breasted parakeets (Pyrrhura griseipectus)

ABSTRACT: The grey-breasted parakeet (Pyrrhura griseipectus) is an endangered psittacine species that have been affected by illegal trade and deforestation. Currently, this endemic species is only found in three areas in Ceará state, in Brazil. This study aimed to investigate the frequency and diversity of Enterobacteriaceae in wild adult grey-breasted parakeets and determine their susceptibility to antimicrobial agents. Cloacal swab samples were collected from 27 individuals and environmental swabs (drag swabs) from five nests used by these birds. Twenty-seven strains from nine species of Enterobacteriaceae were recovered from cloacal swabs, and the most prevalent bacteria strains were Hafnia alvei (22%) and Pantoea agglomerans (22%). From environmental nest samples, seven strains from three bacterial species were isolated, being the P. agglomerans the most frequent species (100%). Twenty-two of the 27 isolates (81.4%) exhibited antibiotic resistance, varying from one to eight of the 12 antimicrobials commonly used. Resistance to amoxicillin was the most prevalent (70.4%), followed by azithromycin (22.2%) and ceftriaxone (18.5%). None of the strains were resistant to gentamicin, tobramycin, ciprofloxacin or tetracycline. The H. alvei was the main species presenting multidrug resistance, including resistance against meropenem, which is an important finding. These results could provide interesting information on the health of these endangered wild grey-breasted parakeets. They could also indicate that the obtained isolates are part of a group of bacteria that are typical components of the enteric microbiota of birds, which present elevated rates of resistance to amoxicillin.

RESUMO: O periquito-de-cara-suja (Pyrrhura griseipectus) é uma espécie de psitacídeo considerado pela IUCN como ameaçado de extinção, resultado do comércio ilegal e do desmatamento. Atualmente, essa espécie endêmica é encontrada apenas em três áreas no estado do Ceará, Brasil. O objetivo deste estudo foi investigar a frequência e a diversidade de Enterobacteriaceae em periquitos de peito cinza adultos selvagens e determinar sua suscetibilidade a agentes antimicrobianos. Amostras de suabes cloacais foram coletadas de 27 indivíduos e de suabes ambientais (suabes de arrasto) de cinco ninhos utilizados por essas aves. Vinte e sete cepas de nove espécies de Enterobacteriaceae foram isoladas a partir de suabes cloacais, sendo as cepas bacterianas mais prevalentes Hafnia alvei (22%) e Pantoea agglomerans (22%). Das amostras ambientais de ninhos foram isoladas sete linhagens de três espécies bacterianas, sendo P. agglomerans a espécie mais frequente (100%). Vinte e dois dos 27 isolados (81,4%) exibiram resistência a antibióticos, variando de um a oito dos 12 antimicrobianos comumente usados. A resistência a amoxicilina foi a mais prevalente (70,4%), seguida por azitromicina (22,2%) e ceftriaxona (18,5%). Nenhuma das cepas era resistente à gentamicina, tobramicina, ciprofloxacina ou tetraciclina. H. alvei foi a principal espécie que apresentou resistência a múltiplas drogas e que também esteve associada a um outro achado relevante desta pesquisa, que foi a detecção de um caso de resistência ao meropenem. Esses dados fornecem informações relevantes sobre a saúde desses periquitos selvagens ameaçados e permite concluir que os isolados obtidos fazem parte de um grupo de bactérias que normalmente compõe a microbiota entérica das aves, sendo a amoxicilina envolvida em elevadas taxas de resistência.

Evaluation of beak and feather disease virus, avian polyomavirus and avian papillomavirus of captives psittacine birds in Seri Kembangan, Selangor, Malaysia

Aims@#Psittacine birds such as parrots, macaws, cockatoos, lovebirds and parakeets, are widely reared as household pets or at aviary due to their attractive features. However, the status of virus-causing diseases of psittacine species in Malaysia is fairly under-documented. Therefore, this study was aimed to detect the presence of three common avian viruses that infect psittacine birds, i.e. beak and feather disease virus (BFDV), avian polyomavirus and avian papillomavirus. @*Methodology and results@#Faecal samples from twelve asymptomatic captive psittacine birds of different species were collected from an undisclosed animal garden in Serdang, Selangor, Malaysia. Briefly, the sample was homogenised and resuspended with SM buffer with the ratio 1:1 (weight of sample/g: volume of SM buffer/mL) before centrifugation at 1,000 × g for 20 min. The supernatant was collected and filtered before subjected to genomic DNA extraction using a commercialised kit. Polymerase chain reaction (PCR) technique was used to screen the V1, VP1 and L1 genes of beak and feather disease virus (BFDV), avian polyomavirus and avian papillomavirus, respectively. Findings revealed that the samples were negative for BFDV and avian polyomavirus. However, positive results of 1.5 kbp PCR amplicon were detected for avian papillomavirus in four out of the 12 samples (33.33%), which was from the white-crested cockatoo, African grey parrot, yellow-collared macaw and Senegal parrot. Sequence analysis of the L1 gene from the Senegal parrot Poicephalus senegalus revealed 93% identity to a reference Psittacus erithacus timneh avian papillomavirus.@*Conclusion, significance and impact of study@#This study added to the limited prevalence data of three important avian viruses which infect captive psittacines in Seri Kembangan, Selangor, Malaysia. Avian papillomavirus, but not BFDV and avian polyomavirus, was detected in the collected captive psittacine birds. Therefore, a routine screening can be performed to monitor the health status of birds despite their asymptomatic manifestation, in order to prevent possible virus transmission.

Companion psittacine birds as reservoir of gentamicin and vancomycin-resistant Enterococcus spp / Psitacídeos de companhia como reservatórios de Enterococcus spp. gentamicina e vancomicina-resistentes

Enterococcus are recognized worldwide as significant nosocomial agents that have been continuously envolving to adapt to different niches and acquire resistance to several antibiotic classes. Vancomycin and gentamicin-resistant strains of E. faecalis and E. faecium have been associated with nosocomial human infections. Some epidemiological studies suggest the participation of pets as reservoirs of vancomycin and gentamicin-resistant Enterococcus strains. However, the role of companion birds as reservoirs of these strains has been poorly studied. In this study, 126 psittacine birds were evaluated and 26.9% carried Enterococcus spp., including the species E. faecalis, E. faecium, E. hirae, E. phoeniculicola, E. gallinarum and E. casseliflavus. The antibiotic resistance profile showed four high-level gentamicin-resistance (HLGR) strains. In addition, two strains presented intermediate levels of vancomycin resistance. Resistant strains were isolated from fecal and oropharynx samples of sick and clinically healthy birds, suggesting that psittacine birds may act as reservoirs of HLGR Enterococcus spp. However, sick birds appear to be more implicated in the enterococci transmission than healthy birds.(AU)

Enterococcus são reconhecidos mundialmente como significantes agentes nosocomiais, que têm continuamente se adaptado a diferentes nichos e adquirido resistência a várias classes de antibióticos. Cepas de E. faecalis e E. faecium vancomicina e gantamicina-resistentes têm sido associadas a infecções nosocomiais em humanos. Alguns estudos epidemiológicos sugerem a participação de aves como reservatórios de cepas de Enterococcus vancomicina e gentamicina-resistentes. Entretanto, a relação das aves de companhia como reservatórios destas cepas tem sido pouco estudada. Neste estudo, 126 psitacídeos foram avaliados, e 26,9% destes eram portadores de Enterococcus spp., incluindo as espécies E. faecalis, E. faecium, E. hirae, E. phoeniculicola, E. gallinarum e E. casseliflavus. O perfil de resistência antibiótica mostrou quatro cepas com alto nível de resistência a gentamicina (ANRG). Além de duas cepas com nível intermediário de resistência a vancomicina. As cepas resistentes foram isoladas de amostras fecais e de orofaringe de aves doentes e clinicamente saudáveis, sugerindo que psitacídeos podem estar atuando como reservatórios para Enterococcus spp. com ANRG. Contudo, Aves doentes parecem estar mais relacionadas à transmissão de enterococcus, do que aves saudáveis.(AU)

Survey of Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Sarcocystis neurona antibodies in wild red-tailed Amazon parrots (Amazona brasiliensis) / Pesquisa de anticorpos anti-Toxoplasma gondii, anti-Neospora caninum e anti-Sarcocystis neurona em papagaios-de-cara-roxa (Amazona brasiliensis) de vida livre

Abstract Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Sarcocystis neurona are obligate intracellular parasites within the phylum Apicomplexa. The red-tailed Amazon parrot (Amazona brasiliensis) is a near-threatened species of psittacine that is endemic to the Atlantic Forest of Brazil and has been designated as a bioindicator because of its sensitivity to environmental qualitative status and changes. The aim of this study was to evaluate the presence of antibodies against T. gondii, N. caninum and S. neurona in wild red-tailed Amazon parrot nestlings on Rasa Island, Brazil. Blood samples were collected from 51 parrots and plasma samples were stored at - 20 °C until immunofluorescence antibody tests (IFAT) were performed. Antigen slides were prepared using tachyzoites of T. gondii (RH strain) and, N. caninum (NC-1 strain) and using merozoites of S. neurona (SNR37 strain). Plasma samples were tested at initial dilutions of 1:16 for T. gondii, 1:50 for N. caninum and 1:5 for S. neurona. An anti-chicken antibody conjugated with FITC was used as a secondary antibody at 1:50 dilution. No antibodies for any of these three protozoa were found, thus suggesting that these wild red-tailed Amazon parrot nestlings had not been exposed to these parasites.

Resumo Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Sarcocystis neurona são protozoários intracelulares do filo Apicomplexa. O papagaio-de-cara-roxa (Amazona brasiliensis) é um psitacídeo endêmico da floresta atlântica, considerado uma espécie quase ameaçada de extinção e bioindicadora por sua sensibilidade às mudanças no ambiente. O objetivo do presente estudo foi detectar a presença de anticorpos contra T. gondii, N. caninum e S. neurona em filhotes de papagaios-de-cara-roxa (Amazona brasiliensis) de vida livre na Ilha Rasa, Brasil. Amostras de sangue foram coletadas de 51 papagaios e armazenadas a - 20ºC até a realização da Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). As lâminas de RIFI com os antígenos, foram preparadas com taquizoítos de T. gondii (cepa RH) e N. caninum (cepa NC-1) e com merozoítos de S. neurona (cepa SNR37). Os plasmas foram diluídos em PBS (Ph 7,2) nas diluições 1:16 para T. gondii, 1:50 para N. caninum e 1:5 para S. neurona. O conjugado anti-IgG de galinhas marcado com fluoresceína (FITC) foi utilizado na diluição de 1:50. Não foram detectados anticorpos para os três protozoários nas amostras sugerindo que os filhotes de papagaios-de-cara-roxa não foram expostos aos protozoários.

Detección y caracterización molecular de Chlamydia psittaci y Chlamydia abortus en psitácidos mascotas en la provincia de Buenos Aires, Argentina / Detection and molecular characterization of Chlamydia psittaci and Chlamydia abortus in psittacine pet birds in Buenos Aires province, Argentina

In order to determine the presence and genetic diversity of Chlamydia spp. in the north-eastern area of Buenos Aires province, Argentina, conjunctival, oropharyngeal, cloacal swab and tissues were collected from a total of 90 psittacine pet birds of different age and clinical manifestations. Through molecular methods, Chlamydiaceae was detected in 30% (27/90) of the samples, out of which 70.3% (19/27) were positive for Chlamydia psittaci and 14.9% (4/27) for Chlamydia abortus. Nine C. psittaci positive samples were genotyped by ompA gene sequences, 8 clustered within genotype A and 1 within genotype B. A significant association was observed between the presence of Chlamydia spp. and the manifestation of clinical signs compatible with chlamydiosis, as well as with the age of the birds (younger than one year old). This report contributes to the improvement of our understanding of chlamydial agents in our country.

Con el objetivo de determinar la presencia de Chlamydia spp. en psitácidos del área noreste de la provincia de Buenos Aires y conocer su diversidad genética, se recolectaron y analizaron mediante métodos moleculares hisopados conjuntivales, orofaríngeos, cloacales y tejidos de un total de 90 psitácidos de diferentes edades y con diversas manifestaciones clínicas. El 30% (27/90) de las muestras procesadas fueron positivas para Chlamydiaceae; el 70,3% (19/27) de estas resultaron positivas para Chlamydia psittaci y el 14,9% (4/27) para Chlamydia abortus. Nueve muestras positivas para C. psittaci fueron genotipificadas por secuenciación del gen ompA: 8 correspondieron al genotipo Ay una al genotipo B. Se observó una asociación significativa entre la presencia de Chlamydia spp. y la manifestación de signos clínicos compatibles con clamidiosis, como así también con la edad de las aves (menores de un ano). Este informe contribuye a mejorar nuestro conocimiento de los agentes clamidiales en nuestro país.

Investigação de Salmonella spp. em Psittaciformes exóticos e nativos mantidos em cativeiro na região central do Rio Grande do Sul / Investigation of Salmonella spp. in exotic and native Psittaciformes kept in captivity in the central region of Rio Grande do Sul

As doenças infecciosas são reconhecidamente causadoras de declínios populacionais de animais silvestres e algumas delas podem representar ameaça à saúde pública. O presente estudo objetivou investigar a ocorrência de Salmonella spp. em Psittaciformes exóticos e nativos mantidos em cativeiro na região central do Rio Grande do Sul, além de comparar os resultados obtidos por meio do método bacteriológico convencional e da reação em cadeia da polimerase (PCR), mediante a utilização de material fecal do ambiente, evitando-se o estresse da contenção. Durante os meses de agosto/2016 e setembro/2016 foram coletadas amostras de fezes frescas de 90 gaiolas em dois criatórios, representando 180 aves. Com as duas técnicas empregadas nas análises, as amostras foram negativas para Salmonella spp., contudo foram detectadas bactérias da família Enterobacteriaceae: Escherichia coli, Cedecea sp. e Citrobacter freundii. Considera-se importante a continuidade do monitoramento dos criatórios, já que o patógeno investigado pode estar em aves portadoras e se manifestar em situações de estresse, representando riscos enquanto zoonose e prejuízos à saúde das aves.(AU)

Infectious diseases are known to cause decline in wildlife population and some of them may represent a threat to public health. This study aimed to investigate the occurrence of Salmonella spp. in exotic and native Psittaciformes kept in captivity in the central region of Rio Grande do Sul, Brazil, and to comparing the results obtained through the conventional bacteriological method and the polymerase chain reaction (PCR), using fecal matter collected from the environment, avoiding the containment stress. From August to September 2016, samples of fresh feces were collected from 90 cages in two breeding grounds, representing 180 birds. According to both analysis techniques the samples were negative for Salmonella spp., however, bacteria from the Enterobacteriaceae family: Escherichia coli, Cedecea sp. and Citrobacter freundii were detected. Continuous monitoring of breeding grounds is important since the pathogen investigated can be found in carrier birds and manifest itself in stressful situations presenting risks such as zoonosis and reduced bird health.(AU)

Proventricular dilatation disease (PDD) outbreak in blue-and-gold macaws (Ara ararauna) in the State of Santa Catarina, southern Brazil / Surto de doença da dilatação proventricular em araras-canindé (Ara ararauna) no estado de Santa Catarina, sul do Brasil

Proventricular dilatation disease (PDD) is a lethal and important disease of captive psittacine birds, and affects a wide range of species, including endangered ones, and lacks an effective treatment. This report describes PDD in three blue-and-gold macaws (Ara ararauna) in southern Brazil. All three macaws originated from the same aviary and presented similar clinical signs including anorexia, apathy, emaciation and prostration. At necropsy, one of the macaws presented an enlarged proventriculus. Histologically, lymphoplasmacytic infiltrates was observed in the ganglia and nerves of the esophagus, crop, proventriculus, ventriculus, heart, adrenal glands, and adrenal medulla of all three cases. Two macaws had meningoencephalomyelitis and one had myocarditis. Immunohistochemistry identified PaBV antigen in the brain, proventricular, ventricular ganglia, and epicardial ganglia, and cardiomyocytes of all three macaws.(AU)

A doença da dilatação proventricular (PDD) e uma importante e fatal doença de psitacídeos de cativeiro, que afeta uma grande variedade de espécies e não tem um tratamento efetivo até o momento. Este relato descreve PDD em três araras canindé (Ara ararauna) no sul do Brasil. Todas as três araras eram provenientes do mesmo criatório e apresentaram sinais clínicos semelhantes incluindo anorexia, apatia, emaciação e prostração. Na necropsia, uma das araras apresentou proventrículo dilatado. No exame histopatológico, infiltrados linfoplasmacitários foram observados em gânglios e nervos do esôfago, inglúvio, proventrículo, moela, coração, glândulas adrenais e rins de todos os casos. Adicionalmente, meningoencefalomielite foi observada em duas araras e miocardite em uma. A imuno-histoquímica identificou antígenos de PaBV no encéfalo, coração, proventrículo e moela de todos os casos.(AU)

Use of collard green stalks as environmental enrichment for cockatiels (Nymphicus hollandicus) kept in captivity / Utilização de talos de couve como enriquecimento ambiental para calopsitas (Nymphicus hollandicus) mantidas em cativeiro

The objective of this study was to evaluate the influence of collard green stalks as environmental enrichment on the behavior of cockatiels (Nymphicus hollandicus) maintained in captivity. Sixteen birds were housed individually in cages and fed a commercial diet for parrots and seed mix, with water ad libitum during 12 days in climatic chamber with temperature and relative humidity simulating tropical conditions. The animals (n = 8) were divided into two groups, control and enriched, and the experimental period was divided into two phases (during and after enrichment) of four days each. The collard green stalks were used as enrichment only during the first period of the experiment, daily changed and maintained only during the day. The stalks increased the feed intake and decreased the sleep activities. No effect was observed on the body surface temperature, locomotion, maintenance and other resting activities. Small undesirable activities were detected. It was concluded that collard green stalks can be used as environmental enrichment, becoming part of food preferences of cockatiels. However, its use does not significantly alter the behavior of birds kept in captivity.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a influência de talos de couve como enriquecimento ambiental sobre o comportamento de calopsitas (Nymphicus hollandicus) mantidas em cativeiro. Dezesseis aves foram alojadas individualmente em gaiolas e alimentadas com dieta comercial para psitacídeos e mistura de sementes, com água ad libitum durante 12 dias, em câmara climática com temperatura e umidade relativa do ar simulando condições tropicais. Os animais (n=8) foram divididos em dois grupos, controle e enriquecido, e o período experimental foi dividido em duas fases (durante e após o enriquecimento) de quatro dias cada. Os talos de couve foram usados como enriquecimento apenas durante o primeiro período do experimento, trocados diariamente e mantidos apenas durante o dia. Os talos aumentaram o consumo de ração e diminuíram o comportamento dormir. Nenhum efeito foi observado nas outras atividades de descanso, na temperatura da superfície corporal, na locomoção e manutenção. Foram detectadas pequenas atividades indesejáveis. Concluiu-se que os talos de couve podem ser usados como enriquecimento ambiental, formando parte das preferências alimentares de calopsitas. No entanto, seu uso não altera de maneira expressiva o comportamento das aves.(AU)

Detecção e avaliação do perfil de sensibilidade antimicrobiana de enterobactérias isoladas de periquitos cara-suja (Pyrrhura griseipectus) em cativeiro / Detection and evaluation of the antimicrobial sensibility profile of enterobacteria isolated from captive Grey-breasted parakeet (Pyrrhura griseipectus)

This study was conducted to detect enterobacteria in captive Grey-breasted parakeet from a commercial breeding located in the state of Ceara. 25 individual cloacal swabs were collected and this material was subjected to microbiological processing to obtain the bacterial isolation, identification, and evaluation of the sensitivity profile to antimicrobials. The bacterial isolation in ten samples was determined, belonging to the genera Enterobacter, Hafnia, Serratia, Escherichia, Pantoea and Klebsiella, in which these last three corresponded to the bacteria most isolated, with respective percentages of 28.6%, 21.4%, and 21.4%. As for the sensitivity profile, antibiotics to which the bacteria showed more resistance were trimethoprim-sulfamethoxazole (57%), tetracycline (21%), and azithromycin (43%). Thus, it was shown that the parakeets were carriers of Enterobacteriaceae with resistance characteristics.(AU)

Genetic similarity between APEC and Escherichia coli strains isolated from Guaruba guarouba in a survey on healthy captive psittacine birds / Similaridade genética entre APEC e cepas de Escherichia coli isoladas de Guaruba guarouba em um estudo com psitacídeos hígidos de cativeiro

The role of psittacine birds as a reservoir of avian pathogenic Escherichia coli (APEC) is not known but would be helpful in understanding the human – animal interface, since the enteric microbiota of these birds consists of Gram positive bacteria. The aim of this study was to identify the presence of APEC in feces of clinically healthy Guaruba guarouba. To do this, we isolated and analyzed E. coli from cloacal fecal samples taken from 87 psittacine birds from six zoologic parks, three commercial breeders and one conservation breeder. Of the 87 birds examined, 46 (52.87%) presented E. coli in feces. The presence of the following eight virulence genes was determined by the polymerase chain reaction (PCR): irp2, iucD, iss, vat, cvi/cva, tsh, astA, and papC, and 29 (63.04%) of 46 E. coli isolates tested were positive at least one of the eight genes studied. The frequency of virulence genes observed in isolates of E. coli were 32.6% (15/46) irp2, 26% (12/46) iucD, 19.5% iss (9/46), 17.4% vat (8/46), 17.4% cvi/cva (8/46), 8.7% tsh (4/46), 4.4% astA (2/46) and 0% papC (0/46). The isolates were grouped in 13 genotypic profiles according to virulence gene combinations, but only 2 isolates were classified as APEC, with the pattern iuc, iss, cvi/cva, irp + and iuc, iss, cvi/cva, irp, tsh, vat +. This study reveals the presence of APEC in clinically healthy captive G. guarouba, suggesting that these psittacine birds may act as reservoir for pathogenic microorganisms. Epidemiological studies are needed to determine the relevance of this species as a reservoir and the implications for conservation of endangered species G. guarouba.

O papel dos psitacídeos como reservatório de Escherichia coli patogênicas para aves (APEC) não é conhecido, mas será útil para a compreensão da interface humano-animal, uma vez que a microbiota entérica destas aves é composta por bactérias Gram-positivas. O objetivo deste estudo foi identificar a presença de APEC em fezes de Guaruba guarouba clinicamente saudáveis. Para isso, foram isoladas e analisadas E. coli presentes em fezes cloacais coletadas de 87 psitacídeos, alojados em seis zoológicos, três criatórios comerciais e um criatório conservacionista. Das 87 aves examinadas, 46 (52,87%) apresentaram E. coli nas fezes. A presença de oito genes de virulência foi determinada pela reação em cadeia pela polimerase (PCR): irp2, iucD, iss, vat, cvi/cva, tsh, astA, e papC, e 29 (63,04%) dos 46 isolados foram positivos para pelo menos um dos oito genes estudados. A frequência dos genes de virulência observada nos isolados de E. coli foi 32.6% (15/46) irp2, 26% (12/46) iucD, 19.5% iss (9/46), 17.4% vat (8/46), 17.4% cvi/cva (8/46), 8.7% tsh (4/46), 4.4% astA (2/46) e 0% papC (0/46). Os isolados foram agrupados em 13 perfis genotípicos de acordo com combinações de genes de virulência, mas apenas duas amostras foram classificadas como APEC, com o perfil iuc, iss, cvi/cva, irp + e iuc, iss, cvi/cva, irp, tsh, iuc, iss, +. Este estudo revela a presença de APEC em aves de cativeiro (G. guarouba) clinicamente saudáveis, sugerindo que estes psitacídeos possam atuar como reservatórios de micro-organismos patogênicos. Estudos epidemiológicos são necessários para determinar a relevância desta espécie como reservatório e as implicações para a conservação da espécie ameaçada G. guarouba.

Sorogrupos e genes de virulência em Escherichia coli isoladas de psitacídeos / Serogroups and virulence genes of Escherichia coli isolated from psittacine birds

Escherichia coli isolates from 24 sick psittacine birds were serogrouped and investigated for the presence of genes encoding the following virulence factors: attaching and effacing (eae), enteropathogenic E. coli EAF plasmid (EAF), pili associated with pyelonephritis (pap), S fimbriae (sfa), afimbrial adhesin (afa), capsule K1 (neu), curli (crl, csgA), temperature-sensitive hemagglutinin (tsh), enteroaggregative heat-stable enterotoxin-1 (astA), heat-stable enterotoxin -1 heat labile (LT) and heat stable (STa and STb) enterotoxins, Shiga-like toxins (stx1 and stx2), cytotoxic necrotizing factor 1 (cnf1), haemolysin (hly), aerobactin production (iuc) and serum resistance (iss). The results showed that the isolates belonged to 12 serogroups: O7; O15; O21; O23; O54; O64; O76; O84; O88; O128; O152 and O166. The virulence genes found were: crl in all isolates, pap in 10 isolates, iss in seven isolates, csgA in five isolates, iuc and tsh in three isolates and eae in two isolates. The combination of virulence genes revealed 11 different genotypic patterns. All strains were negative for genes encoding for EAF, EAEC, K1, sfa, afa, hly, cnf, LT, STa, STb, stx1 and stx2. Our findings showed that some E. coli isolated from psittacine birds present the same virulence factors as avian pathogenic E. coli (APEC), uropathogenic E. coli (UPEC) and Enteropathogenic E. coli (EPEC) pathotypes.

Amostras de Escherichia coli isoladas de 24 psitacídeos doentes foram sorogrupadas e investigadas para a presença de genes que codificam os seguintes fatores de virulência: attaching e effacing (eae), plasmídeo EAF (EAF), pili associado à pielonefrite (pap), fímbria S (sfa), adesina afimbrial (afa), cápsula K1 (neu), curli (crl, csgA), hemaglutinina termosensível (tsh), enterotoxina termo-estável 1 de E. coli enteroagregativa (astA), toxina termolábil (LT) e toxina termoestável (STa e STb), Shiga-like toxinas (stx1 e stx2), fator citotóxico necrotizante 1 (cnf1), hemolisina (hly), produção de aerobactina (iuc) e resistência sérica (iss). Os resultados mostraram que os isolados pertenciam a 12 sorogrupos: O7; O15; O21; O23; O54; O64; O76; O84; O88; O128; O152 e O166. Os genes de virulência encontrados foram: crl em todos os isolados, pap em 10 isolados, iss em sete isolados, csgA em cinco isolados, iuc e tsh em três isolados e eae em dois isolados. A combinação dos genes de virulência revelou 11 perfis genotípicos distintos. Todas as amostras foram negativas para os genes que codificam EAF, EAEC, K1, sfa, afa, hly, cnf, LT, STa, STb, stx1 e stx2. Estes resultados demonstraram que algumas amostras de E. coli isoladas de psitacídeos apresentam os mesmos fatores de virulência presentes nos patotipos de E. coli patogênicas para aves (APEC), uropatogênicas (UPEC) e E. coli enteropatogênicas (EPEC).

Detección de anticuerpos IgG contra Chlamydophila psittaci en aves psitácidas en cautiverio: Maracay, Venezuela / Detection of IgG antibodies against Chlamydophila psittaci in captive psittacine birds: Maracay, Venezuela

La clamidiosis es una enfermedad cosmopolita muy conocida en aves de la familia Psitacidae, cuyo agente etiológico es Chlamydophila psittaci. Puede causar desde una leve neumonía hasta la muerte del animal; además es posible su transmisión a otros animales y al humano a través de la inhalación del microorganismo, produciendo cuadros severos de neumonía y otras patologías. Las poblaciones con mayor riesgo de adquirir esta zoonosis son veterinarios, criadores de aves y toda persona en contacto con aves infectadas. En Venezuela no existen registros epidemiológicos de esta enfermedad en psitácidos ni en humanos. El objetivo de este trabajo fue detectar la presencia de anticuerpos contra Chlamydophila psittaci en aves psitácidas del parque Zoológico Las Delicias y el Zoocriadero Canaima por medio de la técnica de ELISA en fase sólida. Para ello se analizaron 24 muestras de suero de aves encontrándose 17 positivas, lo que se traduce en una prevalencia de anticuerpos IgG contra Cp. psittaci de 71%. Con estos resultados se pretende llamar la atención de las autoridades sanitarias respectivas sobre el impacto e importancia de la enfermedad en Venezuela.

Chlamydiosis is a well known cosmopolitan disease in birds belonging to the Psittacidae family whose etiologic agent is Chlamydophila psittaci. It can produce from mild pneumonia to the death of the animal; its transmission to other animals and to humans is also possible through the inhalation of the microorganism, producing severe pneumonia episodes, as well as other pathologies. The populations with the highest risk of acquiring this zoonosis are those of veterinaries, bird keepers and all persons in contact with infected birds. In Venezuela there are no epidemiologic registries of this disease in psittacine birds or in humans. The purpose of this study was to detect the presence of antibodies against Chlamydophila psittaci in psittacine birds from the Las Delicias zoo and the Canaima Zoogrower through a solid phase ELISA technique. Twenty-four serum samples taken from birds were analyzed and 17 were found to be positive, which results in a 71% prevalence of IgG antibodies against C. psittaci. With these results we intend to call the attention of the respective public health authorities on the impact and importance of this disease in Venezuela.

Infecção por C. psittaci: uma revisão com ênfase em psitacídeos / C. psittaci infection: a review with emphasis in psittacines

A clamidiose ou ornitose é uma doença infecciosa, causada pela bactéria Chlamydophila psittaci, que acomete aves e mamíferos. Trata-se de uma das principais zoonoses de origem aviária. A transmissão ocorre principalmente por inalação de secreções contaminadas. Os sinais clínicos mais comuns incluem alterações no sistema gastrointestinal, respiratório e ocular, porém é possível encontrar aves infectadas sem sinais aparentes, dificultando a identificação da doença. O diagnóstico definitivo em aves vivas pode ser difícil, devido às características da infecção pela bactéria. Há duas principais abordagens para o diagnóstico, a primeira envolve a detecção direta da bactéria e a segunda implica a detecção de anticorpos anti-Chlamydophila sp. O tratamento é longo e envolve o uso de tetraciclinas, quinolonas ou macrolídeos, durante 21-45 dias, dependendo da espécie e do fármaco de escolha. Atualmente, o Brasil não dispõe de medidas padronizadas que visam a guiar o clínico na identificação, manejo e tratamento para a doença. Tais medidas tornam-se necessárias, bem como a pesquisa de novos métodos diagnósticos e auxiliares para a doença.

Chlamydiosis or ornitosis is an infectious disease which affects birds and mammals caused by the bacteria Chlamydophila psittaci. It is one of the most important avian zoonosis. The transmission occurs through inhalation of infected secretions. The most common clinical signs include problems in the gastrointestinal, respiratory and ocular tracts. However, it is possible to find infected birds with no clinical signs, which hinders the diagnosis. Definitive diagnosis in live birds can be difficult, because of the bacteria's infection characteristic. There are two main approaches to the diagnosis, the first one involves the direct detection of the bacteria, the second one involves the detection of antibodies anti-Chlamydophila sp. The treatment is long and includes the use of tetraciclines, quinolones and macrolides, during 21-45 days, depending of the specie or drug of choice. Currently, Brazil has no standardized procedures to guide clinicians in the identification, management, and treatment of the disease. Such measures become necessary, as well as research on new diagnostic methods.

Scarlet Macaw (Ara macao) (Psitaciformes: Psittacidae) Parental Nest Visitation in Costa Rica: Implications for Research and Conservation

We studied temporal parental visitation of Scarlet Macaws (Ara macao) to six active nests in the Central Pacific Conservation Region of Costa Rica. Total parental time in the nest decreased significantly as the nestlings aged. Results provide guidelines to scientists for planning invasive activities to nestlings, such as placement of radio collars, or biological sample collection. These activities should be performed close to the end of the nesting period for minimal disturbance of parents and nestlings. Our results also provide information to aid wildlife guards in protecting active nests from poachers when chicks are close to fledging. Rev. Biol. Trop. 57 (1-2): 395-400. Epub 2009 June 30.

Estudiamos las visitas temporales de padres de la lapa roja (Ara macao) a seis nidos activos en el Área de Conservación del Pacifico Central (Costa Rica). El tiempo total que pasaron los padres en los nidos bajó en forma significativa en relación con el crecimiento de los pichones. Estos resultados pueden ayudar a los científicos a planear sus actividades "invasivas", tales como colocación de radio collares o colección de muestras biológicas. Las actividades deben coincidir con el final de la época de anidación para molestar menos a las aves. Nuestros resultados proveen información que puede ayudar a los guardaparques a proteger nidos activos cuando los pichones estan casi listos para salir.